Aislamiento de secuencias de replicación autónoma de Xanthophyllomyces dendrorhous en Saccharomyces cereviciae

Resumen

Xanthophyllomyces dendrorhous (=Phaffia rhodozyma ), es una levadura basidiomicética carotenogénica, en la cual aspectos importantes de su biologia, como la organización general su genoma, número de cromosomas y nivel de ploidía, aún no son completamente entendidos. En atención a esto, se han orientado esfuerzos hacia la obtención de marcadores genéticos de auxotrofia, pigmentación y resistencia a antibióticos. Además. se ha progresado lentamente en estudios moleculares con el objetivo de aumentar el conocimiento de su genética,
mediante el desarrollo de procedimientos de transformación genética, los cuales tienen una eficiencia baja.

Con el objeto de construir un vector de clonado de X. dendrorhous, se describen los experimentos para lograr el clonamiento de Secuencias de Replicación Autónoma (ARS) de este basidiomicete en la levadura
Saccharomyces cerevisiae. Para ello se procedió a transformar la cepa FBL1 -8B de S. cerevisiae con clones recombinantes de la genoteca de X. dendrorhous construida en el vector de integración YIp5. Como resultado se lograron 4 transformantes URA3+ de S.cerevisiae, denominados 6(1), 37(1), 38(1) Y 38(4). Adicionalmente se realizaron experimentos de rescate de plásmidos mediante transformación de E. coli DH5a con DNA total de los transformantes de levadura, rescatándose 6 clones recombinantes. El análisis de restricción de los plásmidos, indicó que 5 son idénticos, estando formados por el vector YIp5 (5.4 kb) Y 3 fragmentos BamHI de 7.7, 2.4 Y J.5 kb. El otro carece del inserto de 2.4 kb. La retransformación de S. cerevciae con estos plásmidos se presentó en alta frecuencia y sugiere la presencia de un ARS. El subclonado de los insertos indica que la función ARS radica en el mayor y corresponde a un rearreglo del vector e inserto.